Invité exo-plank#0 Posté(e) octobre 26, 2010 Partager Posté(e) octobre 26, 2010 Partie 1 : expérimentation de laboratoire La micropropagation Bonjour, Je vais tenter de vous expliquer de la manière la plus simple possible cette technique extraordinaire. Cette idée m'a été donnée par Jahroide et ses questions sur la micropropagation . Problématiques: A quoi sert la micropropagation? Elle sert à régénérer des plantes entières à partir de n'importe quelle partie de cette dernière. De qu'elle partie se sert-on? De toute, une feuille, un bourgeon, une racine, une cellule. Cela parait trop beau, ou est l'arnaque? Il n'y en a pas, cette technique est utilisée dans les laboratoires de recherche, et depuis peu dans les grandes exploitations, permettant de multiplier à l'infini une plante avec des caractères spéciaux. Si d'autres questions vous viennent à l'esprit, n'hésitez pas. Maintenant, la technique à proprement parler, et la vérification scientifique, par la suite je rajouterai comment le faire simplement à moindre coût et sans aucune connaissance. Introduction Outre l'utilisation récréative du cannabis, d'autres comme la production de fibres, de graines à alimentation humaine ou encore de production de molécules pharmaceutiques existent. Ce type d'application à fort coût économique a très vite intéressé les chercheurs. Cependant le cannabis jouissant dune réputation défavorable, très peu de publications sont accessibles. Néanmoins, pour moi la science devant être partagée et surtout pas gardée comme un secret, je vais vous révéler la technique la plus performante à l'heure actuelle pour obtenir une quantité impressionnante de boutures dans un laps de temps fort court. Matériel et méthodes -Germination de graines à l'obscurité dans un milieu de 90% d'humidité pendant 24h. -Stérilisation à l'hypochlorite de calcium 5% pendant 6-8-15 minutes. -Puis remise en germination dans une solution aqueuse à 3% de glucose et 1% de saccharose. -Suivi de la mise en croissance hors sol de plantes. -Arrivées à 3 semaines de croissances, les plantes sont sacrifiées -On part alors de pétiole, d'entre-nœud, de bourgeons axillaires et du bourgeon apical. -Mise en culture dans boite d'Agar-agar pré-stérilisé à l'autoclave, 120°C pendant 45 min. - Puis les cultures sont placées à l'obscurité pendant 3 semaines, en présence d'une balance hormonale favorisant la différenciation des cellules en type racine. Cette enceinte est maintenue à 22°c. -Puis passage en mode éclairage à 22°c, sous photo période de 16/8. - Pour la formation des racines, les plantules régénérées à 2 cm de haut ont été cultivées sur MS basal moyen complété avec 1,0 mg l-1 IAA (Auxine) et 1,0 mgl-1 NAA. Les plantes enracinées ont été transférées vers le sol et cultivées dans une serre. Statistiques Expériences impliquant quatre explants, cinq cultivars et une moyenne de huit combinaisons ont été réalisées dans une étude complète (RCB) de conception en trois répétitions. L'effet des régulateurs de croissance des végétaux sur l'induction pour les différents explants (jeunes feuilles, pétioles, entrenœuds, bourgeons axillaires) a été exprimé en pourcentages. Pour savoir si les résultats étaient significatifs, nous avons utilisé Two-way ANOVA, et normalisé la distribution. Résultats La stérilisation des explants a été meilleure en remuant la solution d'hypochlorite de calcium 5% pendant 15 min respectivement. Toute les préparations ont pu être régénérées en entier, donnant naissance à des lignées génétiquement identiques mais phénotypiquement différentes. En effet partant de plantes dioïques strictes femelles nous sommes arrivés à des phénotypes hermaphrodites ou plutôt d'inter-sexes. Ce phénomène à cependant été contrôlé conduisant à une restauration du phénotype femelle, partant de là une autre étude sera faite pour expliquer cette dédifférenciation ou comment partir de plantes hermaphrodites et induire une différentiation perpétuelle en un seule sexe de manière irréversible. Discussion Il faut préciser que les meilleures régénérations ont été obtenues à partir de pétioles et de feuilles, de plus le bourgeon apical à été régénéré aussi bien en présence que en absence d'hormone sa régénération sur milieu gélosé n'est donc pas obligatoire. Partie 2 : Expérimentation facilité Bonjour, Aujourd'hui je vais tenter de vous expliquer comment faire de la micropropagation sans aucune connaissance. En revanche, il y a un peu de matériel à acheter, compter 50 euro pour réaliser 30 boîtes permettant chacune la micropropagation de 3 échantillons . I- Introduction Cette technique va permettre de régénérer une plante quelle que soit la partie prélevée, mais pour des soucis de technicité et de compétences, nous allons étudier le cas de la régénération par des cellules de parenchymes chlorophylliens de feuille (Pouvoir réducteur sous forme de NADPH(2)+ pour les curieux). Outre l'aspect pratique de pouvoir préparer des milliers de boutures identiques au pied mère en partant de n'importe qu'elle partie de la plante, la micropropagation offre bien d'autres ouvertures plus que passionnantes et gorgées de surprises. En conclusion je vous expliquerai comment croiser vos meilleures plantes mères et les régénérer pour donner naissance à des plantes aux potentiels végétatifs et floristiques pratiquement infinis. Je tiens également à dire que ces protocoles sont ma propriété intellectuelle et qu'aucune utilisation à but lucratif ou associatif ne peut avoir lieu sans ma permission sous risque de poursuites mais l'utilisation personnelle est autorisée. Merci II- Matériels et méthodes Liste du matériels à se procurer : - Un scalpel végétal - De l'alcool à 90% - Une gazinière ou mieux un bec Bunsen - Votre plante à micropropager - Récipient pour micropropager ( boite de pétri, tube à essai, pot yaourt....) - Une pipette précision 0.1ml - Auxine 1mg/L - Cytokinine 1mg/L - Du milieu minérale MS ou Murashige ou Skoog (Tout cela est facilement trouvable sur internet, en cas de problème je rajouterai les adresse où en trouver) Avertissement : - Les hormones ne supportent que très mal la température (elles sont thermolabiles), il est conseillé de les conserver au réfrigérateur à +/- 4°c. Et de ne les sortir que pour les expériences. - Les milieu MS ou autres sont vendus en poudre, il faudra le compléter à l'eau et les faire chauffer au bain marie bouillant pour qu'ils se dissolvent, mais attention à bien les garder à cette température car une fois refroidis, il durcissent et sont inutilisables. - Toute les manipulations doivent se dérouler avec le plus de stérilité possible. Désinfecter le plan de travail, vos mains, tout le matériel, puis allumer votre bec Bensen (flamme blanche) et délimiter un rayon de 20 a 30 cm autour qui constituera votre cône de stérilité où vous manipulerez. Tout se passe dans le cône de stérilité Préparation des milieux : - Désinfecter vos boites à l'alcool, puis au bain marie à 80°c pendant 5 min, puis laissez sécher. - Chauffer votre solution (milieu ms + eau jusqu'au col de la bouteille) au bain marie bouillant, pensez à laisser le bouchon ouvert. Une fois totalement dissout au bout de 30 à 60 minutes, laisser refroidir légèrement pendant 5 min puis couler dans vos boites sur environ 1 cm de profondeur. (conservation 3 semaines maximums) - Minimum 2 boites par expérience, sur la première mettre 1mg/L d'auxine ( 0.5 ml)+ 1mg/L de cytokinine (0.5ml) nous permettra d'obtenir de Cals. Noté MSAC Et sur la deuxième, mettre 0.1mg/l d'auxine (0.5ml) + 1mg/L de cytokinine (0.5ml), ne pas oublier de bien homogénéiser sur tout le substrat. Nous permettra de régénérer, noté MSEL Prélèvement des fragments à micropropager : - Prendre une feuille d'aluminium, la désinfecter au bain marie 80°c pendant 5 min, puis à l'alcool et la garder dans le champ stérile. Cette feuille permettra de stériliser le matériel végétal. - Prendre une feuille de votre plante et la placer entre deux morceaux d'aluminium, laisser en contact 3 min, puis découper un carré de 1cm de coté, en prélevant une partie de la nervure centrale. - Mettre les fragments sur les milieux, sceller les boites avec du scotch ou de la parafilm et placer les boîtes 3 semaines à 1 mois à température 18-20°c et faiblement éclairées. III- Réultats Les milieux MSEL vont développer des bourgeons, de là, rajouter de l'auxine et elles feront des racines, il ne reste plus qu'à les replanter en terre. Les milieux MSAC vont former des amas de cellules indifférenciées et immortelles, en abaissant la température à 10°c vous pouvez les garder en quiscence pendant plusieurs années, et en prélever pour effectuer de la régénération sur milieu MSEL. Il est donc facile de conserver des dizaines de génétiques dans sont frigo et de les régénérer au moment voulu. Cette technique permet la pérennité des variétés et un approvisionnement constant en boutures sélectionnées sur un phénotype intéressant afin de produire des boutures à l'infini. IV- Discutions et évolutions Le principe de la régénération peut également être utilisé pour réaliser des croisements, ceux-ci étant rendus impossibles soit par le nombre de générations demandées (10 ou 20 000), par le nombre de chromosomes inadéquats, par des notions de dominances récessivités, etc... La solution se trouve dans la génération de protoplastes (cellules végétales ayant perdu leur paroi). Puis dans la fusion de deux protoplastes venant de plantes différentes. On obtient donc une cellule possédant les deux génomes et exprimant toutes les particularités des deux plantes. Sans compter qu'elles sont donc au minimum tétraploïdes (voir beaucoup plus) et que du coup les stocks d'hormones de croissances et de floraisons sont doublés. Il suffit donc de régénérer ces protoplastes fusionnés en micropropagation, et l'on obtient des plantes monstrueusement résistantes et productives, sans compter qu'elles peuvent être bouturées ou micropropagées à l'infini. Si cela intéresse du monde je ferai un tuto pour réussir sans connaissance la production et la fusion de protoplastes. D'autres expériences sont également possibles mais on verra ça une prochaine fois. Cordialement Exo-plank#0 Petit complément : Voici la technique mis en vidéo : indisponible actuellement Voici la liste du matériel et la manière de procéder: -ici -ici Exemple de micropropagation réussie : Dad's label 4 Lien à poster Partager sur d’autres sites
bouba 1 707 Posté(e) octobre 26, 2010 Partager Posté(e) octobre 26, 2010 Salut exo-plank#0 Je n'ai bien sur pour l'instant que survolé. Mais je suis cotent de voir cette faq naitre... Je trouve cool que tu est aussi mis les liens video de La micropropagation en complément explicatif de cette faq!! Merci de nous faire partager ça... Bonne fin de mise en page... A bientôt... Bouba. Ps: je pense que c'est voulu pour l'instant... Mais tu n'as pas mis de titre...:wink: Lien à poster Partager sur d’autres sites
Taz.D 0 Posté(e) octobre 26, 2010 Partager Posté(e) octobre 26, 2010 Bonjour, Que dire? Wahou ! C'est trop interessant, j'avais déjà vu quelques trucs sur la micropropagation, mais j'étais loin de me douter que c'était aussi "simple", ou peut-être es-ce très bien expliqué donc merci! Sinon un truc me turlipine après avoir bien lu sujet sur la fasciation et fait le rapport dans ma tete avec certains cours de lycée.. J'voudrais savoir si les phenotypes dit "a trois pales" sont considerer comme des fasciations? -toute! Lien à poster Partager sur d’autres sites
Apo & Boubou 309 Posté(e) août 9, 2011 Partager Posté(e) août 9, 2011 Slt Exo, Merci pour cette base de donnée très intéressante. Pour le problème de photos je te suggère de les héberger directement sur le site grâce à la fonction "joindre un fichier" (sous l'éditeur). Nous ne pouvons pas encore promouvoir tes articles mais des que les problèmes techniques seront résolus nous prendrons tout cela en compte... Merci pour ta compréhension. Ps: n'hésite pas à passer nous voir sur Jabb ++ @Boubou Lien à poster Partager sur d’autres sites
weedman00 3 Posté(e) décembre 19, 2011 Partager Posté(e) décembre 19, 2011 pfff enorme j'ai pas tous lu mais ces vraiment enorme je terminerais au fur et a mesure merci pour tes infos continue Lien à poster Partager sur d’autres sites
leonotis 441 Posté(e) janvier 25, 2012 Partager Posté(e) janvier 25, 2012 (modifié) Merci pour toute ces infos !! un peu compliqué pour le mauvais en chimie que je suis, mais je m'accroche pour comprendre et ça va .... le tuto sur la micro propagation mérite une petit coup de vulgarisation supplémentaire, je m'y interresse depuis deja pas mal de temps mais je comprend toujours pas comment faire !! bonne continuation leonotis Modifié mars 30, 2012 par leonotis Lien à poster Partager sur d’autres sites
expressionlibre 11 Posté(e) mars 13, 2013 Partager Posté(e) mars 13, 2013 Félicitation ! Bravo ! Exellent ! Un vrai chercheur ? si tu test un peut les protocoles je veut bien t'aidez a les améliorers Peace ! Lien à poster Partager sur d’autres sites
Invité goliathe Posté(e) mars 17, 2013 Partager Posté(e) mars 17, 2013 Un très grand merci pour la qualité exceptionnelle de ces posts. Très impressionant ! Lien à poster Partager sur d’autres sites
gardenlord 499 Posté(e) mars 18, 2013 Partager Posté(e) mars 18, 2013 Yep Je me joins aux autreS pour te remercier, du questionnement en perspective Lien à poster Partager sur d’autres sites
trompette 0 Posté(e) mars 20, 2013 Partager Posté(e) mars 20, 2013 (modifié) Salut a tous! J'ai été également très intéressé par ce guide super, même si j'ai pas encore fini de tout lire... Merci à exo! au risque de me faire engueuler, je me permets une petite question: Il semble d'un coté que la plante n'absorbe que très peu d'azote une fois qu'elle est passée en floraison, et qu'elle ait deja tout stocké ce dont elle aura besoin pour la suite. Et de l'autre coté, pratiquement tous les mode d'emplois d'engrais conseillent de continuer à ajouter de l'engrais de croissance pendant la floraison. Alors je me demande si ils préconisent ca uniquement pour nous faire consommer plus, et si du coup on pourrait se passer d'engrais grow pendant la flo. voila, si cette question a déjà été traitée ailleurs, j'en suis bien désolé et je chercherai mieux la prochaine fois. si ca a pas été traité et que ca interesse quelqu'un, ben tant mieux. a plus les ouideux. trompette Modifié mars 20, 2013 par trompette Lien à poster Partager sur d’autres sites
Tsuk 31 Posté(e) mars 25, 2013 Partager Posté(e) mars 25, 2013 Bonjour exo, Je suis très intéressé par la micropropagation, et bien sur par les croisements grâce a cette technique, un tuto pourrai m’intéressait si tu a le temps pour le faire. J'ai une petite question, si jamais je croisent deux génétique provenant de plante qui sont sorti de graine " féminisé " est non " female " je risque un hermaphrodisme sur plante obtenues? Merci d'avance. Lien à poster Partager sur d’autres sites
Frankass1989 242 Posté(e) mars 30, 2013 Partager Posté(e) mars 30, 2013 Bon j'aurai pas de réponse je pense x) Salut Suk, Je peux t'aider je pense.. Les plantes "féminisées" sont des hermas (XXXY pour faire simple) avec très peu de matériel génétique mâle Y (voire pas du tout) et beaucoup beaucoup de femelles X. Donc si tu croises deux féminisées par micropropagation tu as beaucoup de chances d'obtenir des femelles (je te passe les calculs pour les pourcentages) mais toujours un risque d'obtenir des hermas, comme dans un cycle classique. En croisant des vraies femelles (female), tu auras toujours des femelles du point de vue génétique.. Après je sais pas si ce genre de technique peut engendrer un stress ou autre qui ferait qu'on risque d'obtenir des hermas mais ça faut demander à Exo Bonne soirée à tous, 1 Lien à poster Partager sur d’autres sites
Tsuk 31 Posté(e) mars 31, 2013 Partager Posté(e) mars 31, 2013 Merci beaucoup pour vos réponse a tout les deux Je vois, exo tu a parler de la possibiliter de faire un petit tuto explicatif du croisement " croisement somatique je crois que c'est le mots " après je peux chercher tout seul si tu n'a pas le temps En tout cas je suis vraiment admiratif de ton travail, c'est impressionnant et trés agréable de voir des personne comme toi Lien à poster Partager sur d’autres sites
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