Milieu de culture in vitro...

[rr 2]

Bonsoir,

 

Est-ce que quelqu'un connait la composition des milieux de culture in-vitro pour le bouturage ?

 

J'ai vu des milieux à base d'agar et d'éléments nutritifs, mais comment faire ce genre de milieu (composants, méthode) ?

 

Toute info est la bien venue

 

RR

[Invité]

Oui je connais mais à moins d'avoir accés à du matos de biochimiste c'est lourd:

Préparation du milieu de culture

Prélever stérilement 10 mL de chacune des deux solutions minérales complètes (macroéléments et oligoéléments) dans une fiole jaugée de 200 mL et compléter à 200 mL avec de leau distillée.

 

Placer 6 g de glucose et 1.3 g dagar dans un ballon de 300 à 500 mL et verser la solution précédente dans le ballon.

 

Passer le ballon au four à microondes pour dissoudre lagar en surveillant pour éviter les projections.

 

Laisser refroidir jusqu'à 40 à 50°C et verser le milieu dans des petits pots sur une hauteur de 2 à 3 cm en faisant attention de ne pas faire couler de milieu sur les parois.

 

Ajouter éventuellement dans un flacon de lauxine (1 mg.L-1), dans un autre de la kinétine (1 mg.L-1), dans un autre un mélange dauxine (1 mg.L-1) et de kinétine (0.5 mg.L-1).

 

Préparer des bouchons de coton cardé pour chaque pot et les recouvrir dun morceau de papier daluminium.

 

Autoclaver les flacons contenant le milieu. Commencer la préparation de la suite des opérations pendant lautoclavage. Dès quil est terminé, sortir les flacons et les laisser refroidir.

 

Préparation de la zone de travail

 

Nettoyer à leau de Javel le plan de travail autour dun bec bunsen.

 

Préparer un flacon dalcool avec un couvercle, des pinces, un scalpel, une boîte de Pétri stérile en verre, un flacon deau de Javel diluée et 3 flacons deau stérile.

 

Préparation des explants

 

Enlever hors du plan de travail les deux premières couronnes de feuilles dune endive.

 

Toutes les opérations suivantes doivent être menées en conditions stériles.

 

Dans la zone de travail stérile, enlever trois autres couronnes de feuilles avec les pinces stérilisées (tremper lextrémité dans lalcool, la passer à la flamme et laisser refroidir) et les jeter.

 

Prélever une feuille, la tremper dans leau de Javel pendant 5 minutes et la rincer dans 3 bains successifs deau stérile.

 

Placer la feuille dans la boîte de Pétri stérile. En tenant la feuille au fond de la boîte avec les pinces stérilisées, découper un fragment rectangulaire de 2 cm x 0.5 cm verticalement dans la partie médiane de la feuille. Couper lextrémité apicale en biseau.

 

Mise en culture

 

Récupérer les flacons de milieu refroidis et les apporter dans la zone de travail.

 

Enfoncer un explant par sa face plane au centre du milieu de culture (lenfoncer à mi hauteur).

 

Remettre le bouchon de coton et le papier daluminium. Etiqueter le flacon.

 

 

 

 

Solution 1 : macro-éléments (g/L)

Nitrate dammonium 1,65 g

Chlorure de calcium 0,44 g

Sulfate de magnésium 0,37 g

Nitrate de potassium 1,9 g

Phosphate monopotassique 0,17 g

 

Solution 2 : micro-éléments (g/L)

Sulfate de fer 27,85 mg

EDTA dissodique 37,25 mg

Sulfate de manganèse 22,30 mg

Sulfate de zinc 8,6 mg

Acide borique 6,2 mg

Iodure de potassium 0,83 mg

Molybdate de sodium 0,25 mg

Sulfate de cuivre 0,025 mg

Chlorure de cobalt 0,025 mg

Tiens-nous au courant si tu essaye

 

A+

[rr 2]

OK, merci pour ces précisions.

Il est évident que ce n'est pas à la portée de tous mais ne peut-on pas faire plus simple en sachant que cela sera moins stérile et donc qu'il y aura plus de perte.

 

On a beau couper des boutures avec une lame stérile, la bouture est faite en milieu non stérile et le support ne l'est pas non plus.

 

Ne peut-on donc pas préparer une "mixture" permettant de faire des boutures (pas besoin de faire comme en labo avec des bouts d'un milimètre ) en ayant un taux de réussite convenable ?

 

Pourquoi cela ? Pour limiter la place que prènent les dites boutures mais surtout pour permettre un transport de ces dernières. Je ne parle pas spécialement de canna, bien au contraire (Salvia, etc.) !

 

RR

[Invité]

Si c'est à un transport de quelques jours, tu peux préparer des petites branches de facon à ce qu'elle survive 1/2jours dans une boite de cd et ensuite les préparer pour le bouturage...

[rr 2]

Et pour un transport enraciné ?

Est-ce que le taux de réussite ne diminue pas fortement ?

 

RR

[Meuh25 0]

Je suis en option sciences en 5e (en Belgique, donc en terminale pour les français je crois ^^) et je suis des cours de labos, est-ce suffisant pour acceder aux ingrédients nécessaires ? (J'ai pas trop envie de demander à ma prof' si elle a les ingrédients, vu ma réputation, elle va vite comprendre pourquoi )